В 1606 году король Яков I закрепил право на колонизацию Виргинии за двумя акционерными компаниями: Лондонской и Плимутской. Лондонская компания наняла капитана Христофера Ньюпорта. 9 декабря 1606 года экспедиция Ньюпорта, состоящая из трех кораблей («Сьюзан Констант», «Годспит» и «Дискавэри»), вышла из устья Темзы на юг. Пассажирами были джентльмены (в историческом значении этого слова), оказавшиеся не пригодными к жизни на Новой Земле, и сервенты (бедняки). В апреле 1607 года корабли вошли в Чесапикский залив. Руководство колонией было поручено Совету из 7 человек, в число которых входили Ньюпорт, Бартоломей Госнолд, Джон Рэдклиф и Джон Смит. Англичане высадились на территорию континента 14 мая 1607 года. Новый форт был назван Джеймстауном в честь короля Якова I. 22 июня капитан Ньюпорт отплыл в Англию за поселенцами и провизией, оставив здесь 104 человека. Колонисты столкнулись здесь со значительными трудностями, в частности, болезнями, недостатком пищи и воды, голодом и людоедством, большое количество людей погибло. 8 октября капитан вернулся с людьми и провизией, такие поездки он стал совершать регулярно. В начале 1607 Джон Смит ушёл на разведку и был захвачен индейцами. Об этих событиях Джон Смит позже написал книгу. Он рассказывает, что его привели в лагерь вождя Союза алгонкинов Поухотана. Смита должны были казнить ударом дубины по голове, но его спасла юная дочь вождя, Покахонтас (эти события легли в основу известного диснеевского мультфильма). 2 января 1608 года Джон Смит вернулся в Джеймстаун, тогда в поселении проживало всего 38 человек. Именно Джон Смит смог заключить мир с индейцами, позволивший англичанам выжить. Они помогли поселенцам после пожара, торговали с ними. Летом этого же года в колонии начались разногласия и Смит покинул её, чтобы исследовать весь Чесапикский залив, открыть устье Саскуэханны и подняться вверх по Потомаку. Тем временем в колонии началась смута, так что совет попросил Смита вернуться и возглавить колонию. Он согласился, ввёл строгий порядок и дисциплину. Весной 1610 года Вирджинская компания приняла решение вместо избираемого Советом президента, назначить губернатора, а Совет сделать лишь совещательным органом. Изначально обязанности губернатора исполнял Томас Гейтс, однако первым официальным губернатором считается Томас Вест, он же лорд Де Ла Вэрр, в честь которого назван штат Делавэр. Его правой рукой был Сэмюэл Аргал, построивший Норфолк и Хэмптон. В 1611 губернатором стал Томас Дейл, при котором в колонию была привнесена стабильность и основан город Энрико. В апреле 1613 года Аргал заманил на свой корабль Покахонтас и стал ее удерживать. Затем она держалась в Джеймстауне как заложница, что вызвало конфликты с индейцами. Затем она обучалась в соседнем Энрико, где познакомилась с Джоном Ролфом. Он приехал сюда с Бермуд, по дороге потеряв жену и дочь. Они поженились, и на 8 лет между колонистами и индейцами воцарился мир. Затем они съездили в Англию, где индейская принцесса умерла. Джон вернулся в колонию где и умер, позднее в Вирджинию приехал их сын — Томас. С 1617 по 1619 в колонии действовал военный режим Аргала. В эти годы были построены Портсмут и Ньюпорт-Ньюс. Летом 1619 года в Джеймстауне собралась Законодательная ассамблея — Палата горожан (англ. House of Burgesses), первый демократически выбранный орган в Новом Свете. В том же году в город прибыли голландцы с захваченными у португальцев африканцами, которые тогда ещё не использовались в качестве рабов.